Методы определения чувствительности к антибиотикам

Мазок на флору является базовым и обязательным исследованием при посещении гинеколога. Этот метод помогает выявить воспалительный процесс на ранних этапах, отдифференцировать тип возбудителя, определить степень чистоты влагалища и наличие дисбиоза.

Описание

Посев на Listeria (листерии) с определением чувствительности к антибиотикам — исследование, которое проводится для выявления роста бактерий листерий и определения их чувствительности к противогрибковым препаратам. Листериоз — инфекционная болезнь из группы зоонозов. Резервуаром инфекции в природе являются многие виды грызунов, домашние животные (куры, утки, кролики, свиньи, коровы). Листерии устойчивы во внешней среде, длительно сохраняясь в фекалиях, почве, зерне, могут размножаться при температуре холодильника (+4–6º С), но быстро погибают при нагревании и под воздействием дезинфицирующих средств. В большинстве случаев основной путь инфицирования — это употребление инфицированных овощей и фруктов, продуктов животного происхождения. Также источником инфекции могут быть контакты с животными. Наиболее угрожаемым контингентом риска заражения листериозом являются: беременные, новорождённые, а также лица с ослабленной иммунной системой. Инкубационный период составляет 2–4 недели. Клиническая картина при листериозе Клиническая картина заболевания зависит от его формы. Острая — сопровождается ознобом, повышением температуры, также возможна эритематозная сыпь в области крупных суставов, увеличение и болезненность лимфатических узлов. При нервных формах появляются менингеальные симптомы. Иногда в клинической картине на первом плане симптомы острого гастроэнтерита, пиелита, эндокардита. Возможно инфицирование плода трансплацентарно во время беременности. Врождённый листериоз характеризуется развитием септического состояния, которое приводит к гибели детей. Клиническая диагностика трудна, необходимо лабораторное подтверждение, бактериологические посевы мазков из зева, также материалом может служить кровь, спинномозговая и околоплодные жидкости и др. Показания Симптомы, при которых рекомендовано исследование:

  • тошнота, рвота, боли в животе, жидкий стул, озноб, эритематозная сыпь в области крупных суставов, увеличение и болезненность лимфатических узлов, повышение температуры тела до 38–39°С (подозрение на листериоз при острых кишечных инфекциях), так же могут через 3–4 дня присоединяться признаки поражения центральной нервной системы (ЦНС) в виде менингита, энцефалита или их сочетания (наличие симптомов поражения мозговых оболочек в случае перенесённых инфекционных заболеваний в анамнезе);
  • стёртая симптоматика у лиц, относящихся к группе риска заболеваемости листериозом (беременные женщины; люди пожилого и старческого возраста; люди, страдающие онкологическими заболеваниями, инфекцией, вызванной вирусом иммунодефицита (СПИД, ВИЧ-инфекция), лица, длительное время получавшие кортикостероидные препараты, средства, угнетающие иммунитет при пересадке органов и тканей; лица, страдающие алкоголизмом и наркоманией);
  • септическое состояние у новорожденных (врождённый листериоз приводит к гибели детей).

Подготовка Для получения достоверного результата анализ должен проводиться спустя 14–21 день после последнего приёма антибактериальных препаратов. Забор мазков из зева, рото- и носоглотки на бактериологический посев, рекомендуется сдавать натощак, спустя 4–5 часов после последнего приёма пищи. Перед исследованием нельзя полоскать рост и чистить зубы. Интерпретация результатов Результат предоставляется в форме «положительно» или «отрицательно». Отрицательный результат:

  • в анализируемом образце биологического материала не обнаружено фрагментов ДНК, специфичных для Listeria monocytogenes.

Ложноотрицательный результат: концентрация возбудителя в образце ниже границы чувствительности теста. Положительный результат:

  • в анализируемом образце биологического материала обнаружены фрагменты ДНК, специфичные для Listeria monocytogenes.

Ложноположительный результат: нарушение правил взятия биоматериала (контаминация).

Методы определения чувствительности к антибиотикам

В основе большинства методов лежит определение минимальной подавляющей концентрации (МПК). МПК (иногда минимальная ингибирующая концентрация) — наименьшая концентрация антимикробного агента, которая в пробирке полностью подавляет видимый невооруженным глазом рост микроорганизмов. Измеряется МПК в мг/л или мкг/мл

Методы определения МПК

К методам определения МПК относятся:

  1. Методы разведения
    1. Методы разведения (дилюции) в бульоне.
      1. Метод микродилюции
      2. Метод макродилюции
    2. Методы разведения в агаре
  2. Диффузионные методы
    1. с использованием дисков с антибиотиками
    2. с помощью E-тестов.

Методы разведения

Ниже приведен алгоритм проведения метода разведения в бульоне.

Приготовление заданных разведений.

Готовится бульон, содержащий убывающее количество антибиотика,

также готовится контроль, не содержащий антибактериального агента.

Добавление бактериальной суспензии.

К каждому из разведений антибиотика добавляется определенное количество выделенных бактерий.

Инкубация в течение 1-й ночи

Пробирки, содержащие бульон, антибиотик и бактерии оставляем на ночь при t=35-37о .

Анализ результатов.

Мутный бульон свидельствует о росте бактерий. Минимальное содержание антибиотика, где бульон будет свободен от роста бактерий, будет считаться МПК для данного штамма.

Процедура аналогичная для метода разведения в агаре. Метод микродилюции отличается от метода макродилюции объемом используемомого материала.

Диффузионные методы

Определение чувствительности диско-диффузионным методом предполагает следующие этапы:

Помещение бактерий

Помещение суспензии бактерии заданной концентрации (1-2 х 108  КОЕ/мл) в чашку Петри с агаром.

Помещение дисков с антибиотиками

Коммерческие диски, с нанесенным антибиотиком, помещаются в чашку Петри. Диски равномерно распределены по поверхности агара. Антибиотик начинает мгновенно распространяться из диска на поверхность чашки Петри, создавая градиент концентрации таким образом, что наибольшее содержание антибиотика находится возле диска.

Инкубация на сутки

Чашка Петри, содержащая питательную среду (агар), суспензию бактерии и диски с антибиотиками помещаются в термостат для инкубации на сутки при при t=35-37о

Анализ результатов

Оценка происходит путем измерения диаметра зоны вокруг диска, свободной от роста бактерий. Полученный результат сравнивают с стандартами для каждого антибиотика и конкретного штамма бактерии.

E-TEST

E-TEST (BioMerieux) — коммерческий тест, который представляет из себя полоску с нанесенным антибиотиком. Антибактериальное вещество наносится по градиенту концентрации от высокого к низкому, со шкалой, отображающей концентрацию антибиотика в данном месте.

E-test — быстрый и простой метод, в то же время достаточно дорогой, так как для каждого антибиотика необходима отдельная полоска.

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом дисков и серийных разведений

В медицине различают этиотропный и эмпирический подход к лечению препаратами. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам играет в этом разделении решающую роль.

Эмпирическое лечение подразумевает выяснение естественной бактериальной чувствительности и эпидемиологических сведений об устойчивости микроорганизмов.

Учитываются также данные клинических исследований, которые контролируются специалистами.

Преимуществом эмпирического подхода в назначении больному антибиотиков является то, что исключаются затраты времени, финансовых расходов на дополнительные, диагностически неинформативные исследования.

При полном отсутствии эффекта от такого лечения антибиотиками, назначают этиотропное. Назначение больному антибактериальных препаратов этиотропно подразумевает выделение возбудителя заболевания из биологического материала больного, определение чувствительности инфекционного агента к антибиотикам различных групп.

Методики установления восприимчивости

Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам разделяют на две группы. К диффузионным относятся методы:

  • с применением дисков, включающих антибиотики;
  • с применением Е-тестов.

Методики разведения для определения чувствительности выполняются:

  • с применением жидкой среды питания (бульон) – метод серийных разведений;
  • на агаре.

Согласно полученным данным, все бактерии разделяют на 3 типа:

  • чувствительные;
  • умеренно устойчивые;
  • резистентные, согласно методике пограничных концентраций.
Читайте также:  Временные коронки — на передние зубы, современные материалы и цены

Пограничные концентрации зафиксированы в стандартизированных данных NCCLS (США). Данные нормы применяются в клинических либо микробиологических научных исследованиях чувствительности. Наиболее часто применяют методы дисков и серийных разведений.

Чувствительность бактерий к антибиотикам предполагает анализ результатов на основании двух принципов: клинический и морфологический. Клинически определяется эффективность ведения лечения, а морфологически оценивается распределение действующих антибиотиков.

Для клинической расшифровки результата исследования оцениваются в случае использования стандартизированных доз антибактериальных препаратов для заболеваний. Лечение дает хороший положительный эффект.

Устойчивые же к антибиотикам бактерии отличаются тем, что в процессе лечения не теряют своей жизнедеятельности и способности к размножению. Такие микробы именуются как резистентные.

Существует также группа с промежуточной резистентностью бактериальной клетки. Вызываемые такими бактериями заболевания могут успешно лечиться только при использовании максимальных дозировок антибактериального препарата.

Показатель чувствительности по МБК

Иногда проведенных результатов оказывается недостаточно. В таких случаях стоит определить минимальную бактерицидную концентрацию (МБК). Данный показатель отражает минимальное количество антибактериального препарата для ликвидации микробов практически на 100% на протяжении некоторого времени.

Методика с применением дисков

Исследование чувствительности бактерий к антибактериальным препаратам методом дисков заключается в засевании исследуемой культуры бактерий на среду АГВ либо питательный агар.

Затем на засеянный участок при помощи пинцета располагают специальные диски из бумаги, содержащие разные дозы лекарственных средств.

При температурном режиме 37°С выжидают сутки, одновременно оценивая зоны задержки роста культуры.

Для наиболее точных результатов рекомендуется применять стандартные питательные среды и диски. Методика дисков не отличается 100% достоверностью. Большей информативностью обладает метод серийных разведений.

Серийные разведения и их значение

Метод серийных разведений позволяет определить минимально возможную концентрацию антибактериального препарата, которая угнетает рост и размножение микробов. Начинают с приготовления основного раствора с содержанием специального растворителя и медикаментозного средства.

Затем к каждому разведению прибавляют по 0,1 мл культуры бактерий (до 107 микробов в 1 мл), одна из них (последняя) – контрольная. Затем также выжидают сутки при температуре 37°С. Все пробирки мутнеют (кроме контрольной).

В результате сравнения степени помутнения с эталоном определяют, какая бактерия подлежит устранению.

Оценивают результаты метода серийных разведений соответственно таблицам пограничных значений. При применении метода серийных разведений определяют группы чувствительных, умеренно устойчивых и устойчивых бактериальных микроорганизмов.

Бак посев на флору с определением чувствительности к антибиотикам: расшифровка, нормы.

Наиболее простым в проведении и распространённым в клинической практике, является метод диффузии стандартных бумажных дисков, смоченных антибактериальными препаратами, в чашку Петри, заполненную питательной средой. Диски выкладывают по поверхности агара, соблюдая расстояние два сантиметра от края чашки и друг от друга.

После того, как чаша постоит при комнатной температуре, её перемещают в термостат.

Время выдерживания в термостате для каждых представителей флоры разное. Стандартный срок инкубации составляет от трёх до пяти дней.

Далее, оценивается подавление роста тестируемых бактерий:

  • отсутствие задержки роста, указывает на полную устойчивость микроба к применяемому средству;
  • кольцо, вокруг бумажного диска, диаметром до 1.5 см, свидетельствует в пользу слабой реакции. Данный препарат, также не будет эффективен в лечении;
  • зона от 1.5 до 2.5 см, говорит о стандартной чувствительности и умеренной клинической эффективности;
  • сверхчувствительность к препарату, характеризуется зоной более 2.5 см.

Пример

Пациентке установлен диагноз: хламидийный цервицит. Для эмпирической терапии, в данном случае, рекомендованы Азитромицин® или Доксициклин®. Выбор остановлен на первом препарате. Начато лечение. Клинически состояние больной улучшилось.

В результатах посева:

Лекарство Диаметр кольца вокруг диска, в см Степень чувствительности
Доксициклина моногидрат® 1.8 +
Азитромицин® 2.9 ++
Эритромицин® 2.7 ++
Левофлоксацин® 1.3
Офлоксацин® 1.4
Джозамицин® 2.4 ++
Амоксициллин/клавуланат® 1.0
Моксифлоксацин® 1.4
Цефтриаксон® 0.3

Расшифровка посева на микрофлору и чувствительность к антибиотикам:

Данные результаты показывают, что лечение было подобрано правильно.

  • возбудитель имеет высокую чувствительность в отношении Азитромицина®, также для лечения можно было использовать Эритромицин® и Джозамицин®;
  • умеренная чувствительность к Докициклину® допустимо использовать;
  • устойчивость к Левофлоксацину®, Офлоксацину®, Моксифлоксацину®, Амоксициллина/клавуланату®;
  • абсолютная резистентность к Цефтриаксону®.

Проведение Е-теста

Определение восприимчивости к противомикробным средствам проходит аналогично дискодиффузионному методу, однако, вместо смоченных антибактериальными средствами дисков, в агар помещается полоска Е-теста. На ней размечены различные уровни концентрации антибиотика, начиная от максимальной и заканчивая минимальной.

Показатель минимальной концентрации подавления определяют в месте перекреста полоски теста и зоны подавления роста.

Этот метод является простым, но достаточно дорогостоящим, в связи с этим, диффузия дисков применяется чаще.

Читайте далее: Эксклюзивно об антибиотиках при цистите у женщин и мужчин со списками и сравнением

  • Об авторе
  • Недавние публикации

Анна ЧерненкоВрач инфекционист высшей категории с большим опытом работы. Специалист в области терапии инфекционных заболеваний различной этиологии, методах лабораторной диагностики биоматериала. Анна Черненко недавно публиковал (посмотреть все)

  • Все самое важное о прививке от коронавируса
  • Мебендазол – инструкция по применению, аналоги и отзывы
  • Насколько безопасна и эффективна прививка от ВПЧ?

Бакпосев кала

Кишечный тракт имеет постоянных «жителей», которые участвуют в процессах пищеварения, синтезе витаминов и ферментов. Соотношение бактерий является постоянным и может незначительно колебаться в ту или иную сторону.

При снижении иммунных сил, попадании в организм болезнетворных микроорганизмов или длительном приеме антибиотиков происходит нарушение нормального соотношения. Количество лактобактерий и бифидобактерий резко уменьшается, а их место могут занимать патогенные штаммы кишечной палочки, протей, клостридии, синегнойная палочка, дрожжевые грибы и др.

Кал для диагностики собирают в стерильный транспортный контейнер. Результат посева готов от 3 до 7 дней.

Анализ спермы на чувствительность к антибиотикам

Представляет собой бактериологическое исследование эякулята спермы с дальнейшим подбором чувствительных антибиотиков и их концентраций. Чаще всего проводится при лечении бесплодия, и других заболеваний мужской половой системы. В том случае, если заболевание сопровождается инфекционным процессом. Основной причиной мужского бесплодия является в большинстве случаев именно инфекция.

Обычно изначально проводят спермограмму. По результатам устанавливают оплодотворяющую способность спермы. Если в этом анализе обнаружено большое количество лейкоцитов, можно говорить о воспалительном процессе. При этом обычно сразу же назначают микробиологический анализ, поскольку воспаление почти всегда сопровождается инфекцией. Уже на основании полученных результатов подбирают соответствующую терапию. Исследование обычно назначает андролог.

Также поводом для проведения анализа служит простатит, венерические заболевания. Назначают и в том случае, если у партнерши обнаружено венерическое заболевание.

В основе правильного анализа лежит, прежде всего, правильный забор биологического материала. Забирают материал в специальные сосуды с широким горлом. Температура хранения должна соответствовать температуре тела человека. В таком случае материал может храниться не более часа. В замороженном виде может храниться не более суток.

Затем производят его посев на питательную среду. Инкубируют в термостате в течение 1-2 суток. После выделяют чистую культуру, затем проводят идентификацию, определяют чувствительность, а также тип и скорость роста каждой колонии. Чувствительность к антибиотикам определяется в случае выявления патогенных микроорганизмов. В среднем анализ делается 5-7 дней.